ART1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403742-ACT

ヒトのART1は、GPIアンカー型の細胞表面酵素であるecto-ADP-リボシルトランスフェラーゼ1をコードしており、NAD+を基質として細胞外および膜関連タンパク質のモノADPリボシル化を触媒します。この翻訳後修飾は、細胞界面における受容体機能、細胞接着、免疫関連シグナル伝達を変化させ得ることから、ART1は細胞間コミュニケーションやストレス応答の制御に関与すると考えられます。ART1の活性は、炎症性微小環境やがん関連表現型の文脈で研究されており、細胞表面のADPリボシル化の変化が腫瘍—免疫相互作用や転移挙動に影響を与える可能性があります。細胞外NAD+依存性シグナル伝達の媒介因子として、ART1はADPリボシル化がヒト細胞における経路間クロストークをどのように形成するかを調べるための、取り組みやすい入口を提供します。

ART1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ART1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ART1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ART1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はART1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ART1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のART1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるART1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびART1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるART1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。