Arnt 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401039-ACT

O ARNT humano (translocador nuclear do receptor de hidrocarbonetos arílicos; HIF-1β) codifica um fator de transcrição bHLH-PAS que forma heterodímeros com parceiros como AHR e HIF-1α/HIF-2α para coordenar programas de expressão gênica dependentes de estímulos. Complexos contendo ARNT regulam a sinalização de resposta a xenobióticos, a adaptação celular à hipóxia, redes transcricionais angiogênicas e metabólicas e vias mais amplas responsivas ao estresse que influenciam proliferação e diferenciação. Em razão dessas funções, o ARNT é frequentemente estudado em contextos que relacionam exposições ambientais à reprogramação transcricional e em modelos relevantes de doença nos quais a sinalização de hipóxia e a atividade da via AHR contribuem para alterações do estado celular e da expressão gênica. Sua posição central na circuitaria transcricional da família PAS torna o ARNT um nó útil para dissecar a comunicação cruzada entre vias (cross-talk) e mecanismos de controle transcricional.

Arnt 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARNT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arnt 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARNT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARNT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arnt 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARNT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arnt 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arnt 1 em células tumorais com expressão de ARNT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.