ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401568

Visão geral

AURKA codifica a ARK-1, uma quinase de serina/treonina que se localiza nos centrossomos e nos polos do fuso mitótico para coordenar a maturação do centrossomo, a montagem do fuso e a segregação cromossômica precisa. A atividade de ARK-1 é rigidamente regulada ao longo da transição G2/M e interage com circuitos centrais de controle mitótico, incluindo processos dependentes de PLK1 e TPX2, para assegurar a entrada e a progressão oportunas na mitose. A desregulação da sinalização de AURKA está associada a dinâmica anormal do fuso, aneuploidia e instabilidade cromossômica, tornando-a amplamente relevante para estudos de controle do ciclo celular, manutenção do genoma e transformação oncogênica. Em células humanas, a perturbação da função de ARK-1 é comumente utilizada para dissecar respostas de checkpoint, o timing mitótico e vias de estresse acionadas por centrossomos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AURKA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AURKA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AURKA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ARK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AURKA para a investigação da sinalização de ARK-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AURKA críticos para a função ARK-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AURKA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AURKA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ARK-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ARK-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AURKA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AURKA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.