Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400402

概要

AQP2はアクアポリン2をコードしており、腎集合管の主細胞における浸透圧性の水再吸収を制御する、バソプレシンによって調節される水チャネルである。AVPR2–cAMP–PKAシグナル伝達に応答して、AQP2はリン酸化依存的にアピカル膜へ輸送され、エンドサイトーシス・リサイクリングや細胞骨格ダイナミクスと協調して膜の水透過性を微調整する。この経路は、体液バランスに対するホルモン制御を、上皮の極性および膜輸送過程と統合する。AQP2の発現、局在、またはゲーティングの異常は尿濃縮能の低下と関連し、水恒常性や腎尿細管機能障害の研究における機構的な要所として位置づけられる。

Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAQP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AQP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AQP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aquaporin 2/AQP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aquaporin 2/AQP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AQP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aquaporin 2/AQP2の機能に不可欠なAQP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AQP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AQP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aquaporin 2/AQP2 HDRプラスミド（h）および Aquaporin 2/AQP2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAQP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAQP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。