apoC-III CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403887-ACT

ヒトAPOC3はアポリポタンパク質C-III（apoC-III）をコードしており、apoC-IIIは分泌性アポリポタンパク質として、リポタンパク質リパーゼ（LPL）による加水分解を抑制し、さらにレムナント粒子の肝クリアランスを遅延させることで、トリグリセリドに富むリポタンパク質の代謝を調節する。VLDLおよびカイロミクロンレムナントの輸送（トラフィッキング）に対する作用を通じて、apoC-IIIは脂質輸送経路と全身のエネルギー恒常性に影響を及ぼす。APOC3発現の変化は、血漿トリグリセリド高値や動脈硬化惹起性リポタンパク質プロファイルの変化を特徴とする脂質異常症の表現型と関連しており、心代謝リスクの生物学を研究するうえでの機序的な結節点としての有用性を支持している。細胞モデルでは、APOC3の制御を、肝臓における脂質取扱いプログラムの転写制御や、アポリポタンパク質の分泌経路におけるプロセシングと併せて検討できる。

apoC-III CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性APOC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

apoC-III CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における APOC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAPOC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性apoC-IIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAPOC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるapoC-III依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAPOC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるapoC-III経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。