apoB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400705-ACT

O APOB humano codifica a apolipoproteína B (apoB), um componente estrutural essencial de lipoproteínas aterogênicas que serve de arcabouço para a montagem de lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL) em hepatócitos e sustenta sua conversão em lipoproteínas de baixa densidade (LDL) na circulação. A apoB participa do transporte de lipídios e da homeostase do colesterol por meio de vias que regulam a biogênese, a secreção e a captação mediada por receptores de lipoproteínas, integrando-se ao processamento no retículo endoplasmático e ao metabolismo de partículas ricas em triglicerídeos. A expressão desregulada de APOB ou a produção de partículas contendo apoB está fortemente associada a estados hiperlipidêmicos e à biologia da doença cardiovascular, sendo também relevante para o manejo hepático de lipídios e mecanismos associados à esteatose. Como resultado, o APOB é amplamente utilizado para modelar o metabolismo de lipoproteínas, a dinâmica de partículas de apoB e as respostas inflamatórias e vasculares a jusante em sistemas de pesquisa.

apoB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoB em células tumorais com expressão de APOB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.