APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416847-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- APG5/ATG5O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase APG5/ATG5 (h) e o Plasmídeo Double Nickase APG5/ATG5 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATG5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:APG5/ATG5 Anticorpo (C-1): sc-133158
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-416847-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-416847-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG5 (APG5) é um fator essencial da autofagia que se conjuga com ATG12 e se associa a ATG16L1 para formar um complexo central necessário para o alongamento da membrana do autofagossomo e a lipidação de LC3. Por meio dessas funções, ATG5 sustenta a macroautofagia basal e induzida por estresse, a mitofagia e a remoção de agregados proteicos e de organelas danificadas, integrando vias de detecção de nutrientes como mTOR e AMPK à renovação lisossomal. Alterações na atividade de ATG5 têm sido associadas a proteostase desregulada, inflamação e maior suscetibilidade a fenótipos neurodegenerativos, metabólicos, infecciosos e relacionados ao câncer, o que o torna um alvo frequente em estudos de sobrevivência celular e sinalização imune. Em células humanas, a perturbação de ATG5 é comumente usada para distinguir mecanismos dependentes de autofagia de mecanismos independentes de autofagia em respostas ao estresse e no controle de qualidade intracelular.
APG5/ATG5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATG5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATG5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATG5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATG5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.