APC Double Nickaseプラスミド (h): sc-400374-NIC

APCは、アデノマトーシス・ポリポーシス・コリ（adenomatous polyposis coli）をコードする多機能な腫瘍抑制因子であり、β-カテニン分解複合体の足場として機能することで、カノニカルWntシグナル伝達および増殖・分化を制御する転写プログラムを調節する。Wnt経路の制御にとどまらず、APCは微小管、アクチン関連因子、ならびにキネトコア構成因子との相互作用を介して、細胞骨格ダイナミクス、細胞極性、染色体分配を統括する。APC機能の破綻は、β-カテニンの異常な安定化、細胞運命決定の変化、ゲノム不安定性と強く関連しており、腸上皮の恒常性や腫瘍化シグナル機構を研究するうえでAPCは中心的な結節点となる。そのためヒトAPCは、大腸がんモデルや関連するWnt駆動性表現型における経路の再配線を解析する目的で広く用いられている。

APC ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における APC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、APC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、APCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、APCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。