Plasmide Double Nickase (h) AP4A Hydrolase: sc-407028-NIC

NUDT2 code l’hydrolase humaine de l’Ap4A, une enzyme de la famille Nudix qui hydrolyse la diadénosine tétraphosphate (Ap4A) et des dinucléosides polyphosphates apparentés afin de réguler la signalisation intracellulaire des « alarmones ». En contrôlant le renouvellement de l’Ap4A, NUDT2 influence l’homéostasie des nucléotides et des voies sensibles au stress qui affectent les programmes transcriptionnels, le métabolisme de l’ARN et la progression du cycle cellulaire. Dans la littérature, une activité altérée de NUDT2 a été associée à des modifications de la capacité proliférative, des réponses aux dommages de l’ADN et des réseaux de signalisation inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le remodelage contextuel des cascades de signalisation dans les cellules humaines. Comme les niveaux d’Ap4A peuvent moduler les interactions protéine–nucléotide et la signalisation en aval impliquant kinases et protéines adaptatrices, la perturbation de NUDT2 est utile pour disséquer le contrôle, médié par les nucléotides, des transitions d’état cellulaire.

AP4A Hydrolase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NUDT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NUDT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NUDT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NUDT2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.