ANT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400680-ACT

SLC25A5は、アデニンヌクレオチドトランスロカーゼ2（ANT2）をコードしており、ANT2はミトコンドリア内膜に存在するキャリアとして、細胞質のADPとマトリックス側のATPを交換することで、酸化的リン酸化を細胞のエネルギー需要と結び付けています。アデニンヌクレオチドのフラックスとミトコンドリア膜電位を調節することにより、ANT2はバイオエネルギーの恒常性、レドックスバランス、ならびにミトコンドリア透過性遷移（mPT）に関連したストレス応答への感受性に影響します。ANT2の活性は代謝リプログラミングや増殖状態と関連しており、その発現変動は腫瘍代謝や、ミトコンドリア機能障害を伴うその他の疾患の文脈で研究されています。さらに、SLC25A5はX連鎖の溶質キャリアであることから、組織特異的なエネルギー利用や、ANTアイソフォーム間の代償的シグナル伝達の解明においても重要です。

ANT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC25A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC25A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC25A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC25A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC25A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。