ANP32A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-419111-LAC-2

O gene Anp32a de camundongo codifica a ANP32A, uma fosfoproteína nuclear ácida conservada que atua como chaperona de histonas e moduladora da organização da cromatina, influenciando a regulação transcricional e a progressão do ciclo celular. A ANP32A participa de processos nucleares, incluindo o processamento de mRNA e a sinalização associada à proteína fosfatase 2A (PP2A), e tem sido implicada no controle da apoptose e das respostas ao estresse celular por meio de interações com complexos proteicos regulatórios. Alterações na atividade da ANP32A têm sido associadas a fenótipos relevantes para neurodegeneração, biologia tumoral e sinalização inflamatória, tornando esse locus útil para estudar relações genótipo–fenótipo em modelos murinos. A edição gênica de Anp32a dá suporte à investigação mecanística da regulação epigenética, de redes de sinalização nuclear e de vias relevantes para doenças em células primárias e em sistemas in vivo.

As Partículas de Ativação Lentivirais ANP32A (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Anp32a numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ANP32A (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Anp32a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ANP32A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Anp32a e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.