ANO10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417456

Descripción general

ANO10 (anoctamina 10/TMEM16K) es un miembro de la familia TMEM16 residente en el retículo endoplásmico, implicado en el “scrambling” (redistribución) de fosfolípidos y en la dinámica de membranas regulada por Ca2+. Contribuye a la homeostasis del RE, a la distribución de lípidos y a procesos posteriores, como el tráfico vesicular, la función de los sitios de contacto entre orgánulos y las vías de señalización de respuesta al estrés. La alteración genética de ANO10 se asocia con ataxia espinocerebelosa autosómica recesiva y fenotipos neurodegenerativos relacionados, lo que respalda su papel en el mantenimiento neuronal y en la regulación de lípidos de membrana. Por ello, ANO10 se estudia en modelos celulares de neurobiología, estrés del RE y señalización mediada por lípidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ANO10 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ANO10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ANO10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ANO10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ANO10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ANO10 para la investigación de la señalización de ANO10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ANO10 críticos para la función de ANO10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ANO10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ANO10 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ANO10 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ANO10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ANO10 (h) y el plásmido HDR ANO10 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ANO10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ANO10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.