ANO1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401314-NIC

ANO1（TMEM16Aとしても知られる）は、カルシウム活性化クロライドチャネルをコードしており、細胞内Ca²⁺シグナルを陰イオン（アニオン）フラックスに結び付けることで、上皮の体液分泌、膜興奮性、平滑筋トーヌスを調節します。ANO1の活性は、上皮間輸送（経上皮輸送）の様式を形作り、感覚・神経シグナル伝達にも寄与するとともに、細胞容積調節や膜電位に影響するカルシウム依存性経路とも交差します。ANO1の発現や機能の変化は、上皮分泌や気道生理に関わる疾患と関連付けられており、イオンチャネルのリモデリングが増殖、遊走、腫瘍微小環境に影響し得ることから、腫瘍生物学の文脈でも頻繁に研究されています。これらの特徴により、ANO1はヒト細胞におけるクロライドチャネル依存性シグナル伝達やカルシウム駆動性の生理学的プロセスを解明するための有用な標的となります。

ANO1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ANO1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ANO1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ANO1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ANO1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。