Annexin IV CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402134-ACT

ヒトANXA4は、Ca2+依存性のリン脂質結合タンパク質であるアネキシンIVをコードしており、細胞膜に会合して膜輸送、イオンチャネル活性、ならびに細胞皮質の細胞骨格組織化を制御します。アネキシンIVは、小胞融合、上皮極性化、ストレス応答時の膜完全性の維持など、カルシウムシグナル伝達に連動したプロセスに関与します。ANXA4の発現変動は複数の疾患状況で報告されており、とりわけ上皮由来腫瘍では、浸潤、アポトーシス抵抗性、細胞間接着（細胞–細胞ジャンクション）の再構築との関連で研究されています。これらの特性により、アネキシンIVは、ヒト細胞における膜関連シグナル伝達ネットワークおよびカルシウム制御下のダイナミクスを解析するうえで有用な標的となります。

Annexin IV CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANXA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Annexin IV CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANXA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANXA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Annexin IVの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANXA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAnnexin IV依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANXA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAnnexin IV経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。