Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400229-NIC

AGTR1 codifica o receptor de angiotensina II do tipo 1 (AT1), um GPCR de sete domínios transmembrana que medeia a maior parte da sinalização canónica da angiotensina II em tecidos cardiovasculares e renais. Após a ligação do ligando, o AGTR1 acopla-se predominantemente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, a mobilização de cálcio e a sinalização por PKC, podendo também ativar vias de MAPK/ERK, JAK/STAT, ROS dependentes da NADPH oxidase e β-arrestina para regular programas de transcrição, proliferação, inflamação e remodelação da matriz extracelular. A dessensibilização do recetor e o seu tráfego mediado por GRKs e β-arrestinas também moldam a duração do sinal e os desfechos de sinalização enviesada. A sinalização desregulada de AGTR1 está implicada em hipertensão, hipertrofia e fibrose cardíacas, remodelação vascular e doença renal, sustentando a sua utilização em estudos da biologia do sistema renina–angiotensina e de vias de resposta ao stress.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AGTR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AGTR1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AGTR1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AGTR1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.