AMPKβ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402952-ACT

PRKAB1 codifica a subunidade regulatória β1 da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), um sensor central de energia celular que coordena a homeostase metabólica em resposta a sinais de nutrientes e de estresse. A AMPKβ1 sustenta a montagem e a estabilidade do heterotrímero AMPK e contribui para o direcionamento de substratos e a localização subcelular, influenciando assim programas de fosforilação que controlam a captação de glicose, a oxidação de ácidos graxos, a biogênese mitocondrial, a autofagia e a sinalização de mTORC1. Por meio dessas vias, a AMPKβ1 afeta decisões de crescimento celular, o equilíbrio redox e a adaptação à hipóxia e ao estresse energético. A desregulação da sinalização de AMPK tem sido associada a distúrbios metabólicos, inflamação e fenótipos relevantes para o câncer, tornando PRKAB1 um nó útil para estudos mecanísticos de redes de sinalização dependentes de energia.

AMPKβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKAB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AMPKβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKAB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKAB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AMPKβ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKAB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AMPKβ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AMPKβ1 em células tumorais com expressão de PRKAB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.