Plásmido CRISPR de Activación (h) AMPK alpha 2: sc-400277-ACT

PRKAA2 codifica la subunidad catalítica α2 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor energético central que mantiene la homeostasis del ATP celular en respuesta al estrés metabólico. AMPKα2 integra señales ascendentes de LKB1 y CaMKK2 para regular la captación de glucosa, la oxidación de lípidos, la biogénesis mitocondrial y la autofagia mediante vías que incluyen la inhibición de mTORC1 y la activación de ULK1. En tejidos humanos, la actividad de AMPKα2 está estrechamente vinculada a la detección de nutrientes y al equilibrio redox, con amplia relevancia para la desregulación metabólica, la inflamación y los fenotipos de adaptación al estrés observados en contextos cardiometabólicos y asociados a la neurodegeneración. Por ello, modular la expresión de PRKAA2 resulta útil para dilucidar cómo la señalización por estrés energético reconfigura los programas transcripcionales y las decisiones de destino celular.

AMPK alpha 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKAA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AMPK alpha 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKAA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKAA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AMPK alpha 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKAA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AMPK alpha 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AMPK alpha 2 en células tumorales con expresión de PRKAA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.