Plásmido CRISPR de Activación (h) ALPPL2: sc-401492-ACT

ALPPL2 codifica la fosfatasa alcalina tipo placentaria 2, una ectoenzima anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se expresa en la superficie celular, donde hidroliza monoésteres de fosfato y puede modular la disponibilidad extracelular de nucleótidos y fosfato. Gracias a su localización en la membrana y a su actividad enzimática, ALPPL2 se asocia con procesos que incluyen la diferenciación epitelial, la organización de microdominios de membrana y la regulación de entornos de señalización en la membrana plasmática. Se ha descrito una expresión alterada de las fosfatasas alcalinas tipo placentaria en contextos de transformación celular y cambios en el estado de linaje, lo que respalda el uso de ALPPL2 como marcador funcional en estudios de biología tumoral e identidad celular. Su patrón de expresión fisiológica más restringido, en comparación con las fosfatasas alcalinas ubicuas, hace que ALPPL2 sea relevante para investigar programas de expresión de antígenos asociados al cáncer y la remodelación del medio extracelular dependiente de fosfatasas.

ALPPL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALPPL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ALPPL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALPPL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALPPL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ALPPL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALPPL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ALPPL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ALPPL2 en células tumorales con expresión de ALPPL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.