ALPPL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401492-ACT

ALPPL2 codifica la fosfatasi alcalina 2 di tipo placentare (placental-like 2), un ectoenzima ancorato alla membrana tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), espresso sulla superficie cellulare, dove idrolizza i monoesteri fosfatici e può modulare la disponibilità extracellulare di nucleotidi e fosfato. Grazie alla sua localizzazione di membrana e alla sua attività enzimatica, ALPPL2 è associato a processi che includono la differenziazione epiteliale, l’organizzazione dei microdomini di membrana e la regolazione degli ambienti di segnalazione a livello della membrana plasmatica. Un’espressione alterata delle fosfatasi alcaline di tipo placentare è stata riportata in contesti di trasformazione cellulare e di cambiamenti dello stato di linea, a supporto dell’uso di ALPPL2 come marcatore funzionale negli studi di biologia tumorale e di identità cellulare. Il suo pattern di espressione fisiologica più ristretto rispetto alle fosfatasi alcaline ubiquitarie rende ALPPL2 rilevante per indagare i programmi di espressione di antigeni associati al cancro e il rimodellamento del microambiente extracellulare dipendente dalle fosfatasi.

ALPPL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ALPPL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ALPPL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ALPPL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ALPPL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ALPPL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ALPPL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ALPPL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ALPPL2 nelle cellule tumorali con espressione di ALPPL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.