ALKBH8 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-426676-ACT

マウスのAlkbh8は、tRNA修飾酵素であるALKBH8をコードしており、コドン解読に影響するメチル化や酸化的修飾など、いわゆるワブルウリジンの化学修飾における重要な反応を触媒することで、翻訳の忠実性を支えています。tRNA依存的な解読効率を制御することを通じて、ALKBH8はタンパク質恒常性や細胞のストレス適応経路、特に酸化ストレスおよび遺伝毒性条件下での応答に影響を及ぼします。ALKBH8活性の変化は、RNA修飾の全体像（ランドスケープ）の破綻と関連づけられており、それがゲノム安定性、ストレス応答シグナル、ならびにがん生物学や炎症性組織傷害モデルに関わる細胞生存プログラムに影響し得ることが示唆されています。翻訳のエピトランスクリプトーム制御における一つの結節点として、Alkbh8はしばしばレドックスバランス、DNA損傷応答、そしてプロテオスタシス関連表現型の文脈で研究されています。

ALKBH8 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Alkbh8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ALKBH8 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Alkbh8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAlkbh8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ALKBH8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAlkbh8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるALKBH8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAlkbh8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるALKBH8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。