Plásmido Doble Nickase (m) ALCAM: sc-419076-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ALCAM consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ALCAM (m) y el plásmido de doble nickasa ALCAM (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Alcam. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ALCAM Anticuerpo (B-6): sc-74558
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ALCAM | sc-419076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ALCAM | sc-419076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Alcam codifica la molécula de adhesión celular de leucocitos activados (ALCAM/CD166), un receptor de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas que favorece interacciones homofílicas y heterofílicas en la superficie celular. En tejidos de ratón, ALCAM contribuye a la estabilización de los contactos célula–célula, a la organización epitelial y endotelial, y a la guía de células migratorias, conectando complejos de adhesión de membrana con programas de remodelación del citoesqueleto. La adhesión mediada por ALCAM se cruza con procesos como el tráfico de células inmunitarias, el crecimiento de neuritas y el mantenimiento de nichos de células madre/progenitoras, donde una dinámica de adhesión alterada puede modificar la diferenciación y la arquitectura tisular. La expresión o localización desregulada de ALCAM se ha asociado con cambios en la invasión y el potencial metastásico en modelos de cáncer y con microambientes inflamatorios, lo que convierte a Alcam en un nodo útil para estudiar la señalización dependiente de la adhesión y la remodelación tisular.
ALCAM El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Alcam en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Alcam. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Alcam. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Alcam alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.