ALB/Albumin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400269-NIC

ヒトのALB遺伝子は、血漿中で最も豊富なタンパク質であり膠質浸透圧の主要な規定因子でもあるアルブミンをコードしている。アルブミンは脂肪酸、ステロイドホルモン、ビリルビン、ならびに多様な外来性化合物（ゼノバイオティクス）の主要な担体として機能する。主に肝細胞で合成・分泌され、全身への栄養分配、遊離チオール基によるレドックス緩衝、そして血中におけるリガンドの生物学的利用能の調節に寄与する。ALBの発現は肝細胞の分化、肝臓の代謝プログラム、分泌経路機能と密接に関連しているため、肝臓の同一性や成熟を研究する際の指標として広く用いられている。アルブミンの産生や分布の変化は肝機能障害や全身性炎症状態と関連しており、肝臓ストレス応答やタンパク質恒常性をモデル化する上での重要性を裏づけている。

ALB/Albumin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。