Akt1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419071-ACT

O gene murino Akt1 codifica a AKT1, uma quinase de serina/treonina que atua como um efetor central da sinalização da PI3K para coordenar a sobrevivência celular, o metabolismo da glicose, a síntese proteica e a progressão do ciclo celular. Após a ativação a jusante de receptores tirosina-quinase e das vias de insulina/IGF, a AKT1 fosforila alvos que regulam a atividade do mTORC1, os fatores de transcrição FOXO e processos dependentes de GSK3, moldando o crescimento anabólico e as respostas ao estresse. A atividade de Akt1 influencia a remodelação do citoesqueleto e a migração por meio de comunicação cruzada com a sinalização de MAPK e de adesões focais. A sinalização desregulada de AKT1 está amplamente implicada em programas de crescimento oncogênico, resistência à insulina e fenótipos inflamatórios, tornando-a um nó-chave para a investigação de vias em modelos murinos de doenças.

Akt1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Akt1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Akt1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Akt1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Akt1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Akt1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Akt1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Akt1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Akt1 em células tumorais com expressão de Akt1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.