AKR1A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416233-ACT

AKR1A1（aldo-keto reductase family 1 member A1）は、NADPH 依存性の酸化還元酵素をコードしており、反応性アルデヒドやカルボニル基を含む基質の還元を触媒することで、細胞内の解毒およびレドックス恒常性の維持に寄与します。このタンパク質はアルデヒド代謝に関与し、細胞毒性をもつ脂質過酸化産物の蓄積を抑えることで、グルタチオン依存性の防御システムとも機能的に交差します。カルボニルストレスと NADPH 利用を調節することを通じて、AKR1A1 は酸化ストレス応答、ミトコンドリア機能、代謝適応に影響を与えます。AKR1A1 活性の制御異常は、異物（ゼノバイオティクス）処理の変化や細胞ストレス表現型と関連し、代謝疾患、炎症、がん生物学に関わる現象として報告されています。

AKR1A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKR1A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AKR1A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKR1A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKR1A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AKR1A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKR1A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAKR1A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKR1A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAKR1A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。