AIP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417914

概要

WWP2はE3ユビキチンタンパク質リガーゼAIP2をコードしており、HECTドメイン型ユビキチンリガーゼとしてユビキチンの転移を触媒し、タンパク質の安定性やシグナル伝達の出力を調節します。AIP2は、プロテオスタシス、受容体および転写因子の分解・ターンオーバー、さらにTGF-β/SMADシグナル伝達や関連する制御ネットワークにおける経路の微調整など、ユビキチン依存的に制御される重要な細胞プロセスに関与します。これらの機能を通じて、WWP2は細胞増殖、分化、上皮間葉転換（EMT）プログラムの調節に寄与します。WWP2が関与するユビキチン化の異常は、複数の疾患関連モデルで観察されるシグナル状態の変化と関連づけられており、経路の不均衡を研究するうえでの機構的ハブとしての有用性が示唆されています。

AIP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWWP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WWP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WWP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AIP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AIP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WWP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AIP2の機能に不可欠なWWP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WWP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AIP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAIP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WWP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AIP2 HDRプラスミド（h）および AIP2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWWP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWWP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。