AIF Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400370-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AIFO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AIF (h) e o Plasmídeo Double Nickase AIF (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AIFM1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AIF Anticorpo (E-1): sc-13116
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AIF Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400370-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIF Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400370-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O AIFM1 humano codifica o fator indutor de apoptose associado à mitocôndria 1 (AIF), uma flavoproteína oxidorredutase localizada no espaço intermembranar mitocondrial que sustenta a função da cadeia respiratória e a homeostase redox. Sob estresse celular severo, o AIF pode translocar-se para o núcleo e promover morte celular independente de caspases por meio de fragmentação de DNA em larga escala e condensação da cromatina. Assim, o AIFM1 é central para o controle de qualidade mitocondrial, as respostas ao estresse oxidativo e vias de morte celular programada que se cruzam com falhas bioenergéticas e fenótipos neurodegenerativos. A desregulação genética e funcional de AIFM1 tem sido associada a encefalomiopatias mitocondriais, neuropatias periféricas e a contextos mais amplos em que a fosforilação oxidativa comprometida e a sinalização apoptótica alterada contribuem para a biologia da doença.
AIF O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AIFM1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AIFM1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AIFM1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AIFM1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.