Ah Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419054-ACT

O gene Ahr de camundongo codifica o receptor de hidrocarbonetos arílicos (AhR), um fator de transcrição ativado por ligantes que detecta xenobióticos e metabólitos endógenos para regular programas de expressão gênica que controlam a desintoxicação, a função de barreira e a modulação imune. Após a ativação, o AhR transloca-se para o núcleo, heterodimeriza-se com o ARNT e liga-se a elementos de resposta a xenobióticos para induzir alvos como Cyp1a1/Cyp1b1, integrando-se a vias de estresse oxidativo, sinalização inflamatória e metabolismo. A atividade do AhR influencia a diferenciação de células T, a polarização de macrófagos, a homeostase epitelial e redes transcricionais associadas ao ritmo circadiano. A sinalização desregulada do AhR tem sido associada a alterações na suscetibilidade a doenças inflamatórias, nas respostas a tóxicos e na biologia do microambiente tumoral em modelos experimentais de camundongo.

Ah Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ahr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ah Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ahr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ahr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ah Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ahr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ah Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ah Receptor em células tumorais com expressão de Ahr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.