AFP/Alpha fetoprotein Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400355-ACT

O gene AFP codifica a alfa-fetoproteína, uma importante glicoproteína secretada oncofetal, produzida predominantemente pelo fígado fetal e pelo saco vitelino, e cuja expressão é reduzida após o nascimento. A AFP contribui para programas de desenvolvimento ao apoiar a diferenciação de hepatoblastos e ao modular sinais extracelulares que influenciam a proliferação e a sobrevivência. Em tecidos adultos, a reexpressão aberrante de AFP está associada à desdiferenciação da linhagem hepatocelular e a estados transcricionais alterados observados em malignidades hepáticas e em distúrbios hepáticos relacionados. Como uma proteína secretada com perfil de biomarcador, a AFP é frequentemente utilizada para estudar o desenvolvimento do fígado, transições de estado celular hepático e fenótipos secretórios associados a tumores.

AFP/Alpha fetoprotein O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AFP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AFP/Alpha fetoprotein O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AFP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AFP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AFP/Alpha fetoprotein. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AFP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AFP/Alpha fetoprotein no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AFP/Alpha fetoprotein em células tumorais com expressão de AFP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.