ADK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419008

概要

マウスAdkはアデノシンキナーゼ（ADK）をコードしており、アデノシンをAMPへリン酸化する主要な細胞質酵素である。ADKはアデノシンの恒常性およびアデニンヌクレオチドプールの維持に寄与する。ADKは細胞内外のアデノシン濃度を調節することで、プリン作動性シグナル伝達、エネルギー代謝、ならびにS-アデノシルメチオニン／S-アデノシルホモシステイン（SAM/SAH）サイクルへの影響を介したメチル化能に影響を及ぼす。ADK活性は細胞ストレス応答や炎症性シグナルの制御とも関連しており、アデノシン代謝の変化は実験モデルにおいて神経機能障害、発作感受性、組織障害などの状況と関連づけられている。代謝のゲートキーパーとして、ADKはヌクレオチドサルベージ、エピジェネティック制御、免疫代謝適応をつなぐ経路の研究でしばしば注目される。

ADK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADKの機能に不可欠なAdkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびADK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADK HDRプラスミド（m）および ADK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。