Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402994-NIC

ヒトADCY2は、アデニル酸シクラーゼ2（AC2）をコードしています。AC2は膜結合型の酵素で、活性化されたGタンパク質共役受容体（GPCR）の下流でATPを環状AMP（cAMP）に変換します。AC2はcAMPの動態を調節することで、プロテインキナーゼA（PKA）およびEPACシグナル伝達を制御し、イオンチャネル活性、神経伝達物質放出、さらにCREBを介した刺激依存的な遺伝子転写に影響を与えます。ADCY2の活性は、GPCR–Gαs/Gαi経路と統合され、興奮性、代謝、シグナル適応に関わる細胞の意思決定に寄与します。cAMP恒常性に影響する遺伝学的・シグナル伝達上の変化は、神経精神疾患や心代謝系の表現型と関連していることが報告されており、ADCY2はGPCR駆動性シグナル伝達ネットワークの機構研究における重要な標的となります。

Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADCY2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADCY2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADCY2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADCY2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。