Adenylate cyclase 1/AC1/ADCY1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402115-NIC

ヒトのADCY1は、カルモジュリンによって刺激される膜酵素であるアデニル酸シクラーゼ1（AC1）をコードしており、カルシウムシグナルに応答してATPをcAMPへと変換します。AC1由来のcAMPはPKAおよびEPACを活性化し、下流のCREB依存的転写を調節することで、神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、ならびに活動依存的な遺伝子発現を形作ります。Ca2+に結び付いたGPCRシグナル伝達とセカンドメッセンジャーの動態を統合することを通じて、ADCY1は学習・記憶に関連する経路や、より広範な神経発達プログラムに影響を与えます。ADCY1活性の変化に伴うcAMPシグナル伝達の破綻は、神経学的および神経精神医学的表現型との関連で研究されており、機序解明研究における重要性が示されています。

Adenylate cyclase 1/AC1/ADCY1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADCY1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADCY1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADCY1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADCY1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。