Plásmido Doble Nickase (h) Adenosine A2A-R: sc-400807-NIC

ADORA2A codifica el receptor humano de adenosina A2A (Adenosine A2A-R), un GPCR acoplado a Gs que eleva el AMPc intracelular y activa la transcripción dependiente de PKA/CREB en respuesta a la adenosina extracelular. Este eje de señalización modula la neurotransmisión, la vasodilatación y la función de las células inmunitarias, integrando señales de estrés metabólico en las respuestas celulares. El A2A-R establece comunicación cruzada con las vías dopaminérgicas y glutamatérgicas y configura la señalización inflamatoria mediante la regulación, mediada por AMPc, de la producción de citocinas y la actividad de las células T. La desregulación de la señalización de ADORA2A se ha implicado en trastornos neurodegenerativos y neuropsiquiátricos, en la inmunosupresión asociada al microambiente tumoral y en procesos inflamatorios cardiopulmonares, lo que respalda su uso como diana mecanística en modelos relevantes para enfermedades.

Adenosine A2A-R El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADORA2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADORA2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADORA2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADORA2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.