ADAM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418991

概要

Adam5は、膜関連プロテオリシスや細胞—細胞／細胞—細胞外マトリックス相互作用に関与するとされるADAM（ディスインテグリンおよびメタロプロテアーゼ）ファミリーの一員であるADAM5をコードします。ADAMタンパク質は細胞表面タンパク質のエクトドメイン・シェディングに影響を与え、その結果としてシグナル伝達の動態、接着、組織リモデリング過程を形作り得ます。マウス系では、ADAM5は発生・生殖生物学におけるプロテアーゼ依存的な制御という文脈で研究されており、細胞間コミュニケーションや細胞外環境のセンシングを司る経路との関連が示唆されています。関連するADAMファミリー活性の破綻は炎症性シグナルやがんに関連する表現型と結び付けられていることから、Adam5はプロテオリシス駆動型シグナル伝達ネットワークの機序研究に有用な標的となります。

ADAM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdam5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adam5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adam5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADAM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADAM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adam5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADAM5の機能に不可欠なAdam5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adam5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADAM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびADAM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adam5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADAM5 HDRプラスミド（m）および ADAM5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdam5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdam5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。