ADAM4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418990

概要

Adam4は、膜近傍でのプロテオリシスや細胞—細胞／細胞—細胞外マトリックス相互作用に関与するとされるADAM（a disintegrin and metalloprotease）ファミリーの一員であるADAM4をコードします。ADAMタンパク質は、細胞表面受容体や接着分子の細胞外ドメインのシェディングを調節し、シグナル伝達の動態、炎症性の刺激、組織リモデリングに影響を及ぼし得ます。マウス系では、ADAM4は、発生・生殖過程のプロテアーゼ依存的な制御や、微小環境による細胞挙動の制御という文脈で研究されています。ADAMファミリーによるプロテオリシスの破綻（ディスレギュレーション）は、病的なリモデリングや異常なシグナル伝達と広く関連しており、プロテアーゼ駆動性の表現型を解明するための機序的な切り口を提供します。

ADAM4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdam4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adam4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adam4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADAM4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADAM4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adam4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADAM4の機能に不可欠なAdam4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adam4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADAM4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびADAM4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adam4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADAM4 HDRプラスミド（m）および ADAM4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdam4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdam4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。