ACSVL4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402011-ACT

SLC27A4 は ACSVL4（FATP4）をコードしており、ACSVL4 は超長鎖アシル CoA 合成酵素として、長鎖および超長鎖脂肪酸の取り込みと細胞内での活性化（アシル CoA 化）を結び付け、脂質を β 酸化、複合脂質の生合成、ならびに膜リモデリングへと導きます。脂肪酸アシル CoA を生成することで、ACSVL4 は上皮における脂質恒常性やバリア関連プロセスに影響し、細胞ストレス応答や分化を制御する代謝プログラムとも交差します。SLC27A4 活性の制御異常は、表皮での脂質処理の欠陥や脂肪酸ハンドリングの変化と関連づけられており、皮膚生物学、脂質代謝、疾患関連状況における代謝リプログラミングの研究で重要な対象となります。

ACSVL4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC27A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACSVL4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC27A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC27A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACSVL4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC27A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACSVL4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC27A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACSVL4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。