ACSS2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402873-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSS2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSS2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSS2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACSS2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSS2: sc-398559
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSS2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402873-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSS2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402873-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSS2 (Acyl-CoA-Synthetase, kurzkettiges Familienmitglied 2) katalysiert die Umwandlung von Acetat zu Acetyl-CoA und verbindet damit die Acetatverwertung mit dem zentralen Kohlenstoffstoffwechsel und der Lipidbiosynthese. Durch die Bereitstellung von nukleozytosolischem Acetyl-CoA unterstützt ACSS2 die Proteinacetylierung und die Chromatinregulation und verknüpft so die Nährstoffverfügbarkeit unter metabolischem Stress mit der transkriptionellen Kontrolle. Die ACSS2-Aktivität überschneidet sich mit Signal- und Stoffwechselwegen, die den Fettsäurestoffwechsel, die Autophagie und hypoxieadaptive Antworten steuern, und ihre Fehlregulation wurde im Zusammenhang mit metabolischer Reprogrammierung untersucht. Veränderte Acetatflüsse und eine gestörte Acetyl-CoA-Homöostase unter Beteiligung von ACSS2 werden mit Veränderungen des epigenetischen Zustands und Zellzustandsübergängen in Verbindung gebracht, die für die Biologie proliferativer und entzündlicher Erkrankungen relevant sind.
ACSS2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACSS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACSS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACSS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACSS2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.