ACSL5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436628-ACT

O gene Acsl5 de camundongo codifica a acil-CoA sintetase membro 5 da família de cadeia longa (ACSL5), uma enzima associada à mitocôndria que ativa ácidos graxos de cadeia longa em tioésteres de acil-CoA, direcionando-os para a β-oxidação, a síntese de triglicerídeos e a remodelação de fosfolipídios. Ao moldar os pools de acil-CoA e o fluxo lipídico, a ACSL5 influencia o metabolismo energético mitocondrial, a composição de membranas e a sinalização mediada por lipídios. Alterações na atividade da ACSL5 têm sido associadas à desregulação metabólica, incluindo esteatose hepática e resistência à insulina, e são frequentemente estudadas em contextos nos quais a utilização de lipídios e o metabolismo oxidativo contribuem para respostas celulares ao estresse.

ACSL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Acsl5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Acsl5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Acsl5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSL5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Acsl5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSL5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSL5 em células tumorais com expressão de Acsl5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.