ACSL1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420278-ACT

マウスのAcsl1は長鎖アシルCoA合成酵素1（ACSL1）をコードしており、長鎖脂肪酸をアシルCoAチオエステルへ変換して活性化する酵素である。これにより脂質基質はβ酸化、リン脂質リモデリング、トリグリセリド合成へと利用される方向にコミットされる。ACSL1は、ミトコンドリア関連および小胞体（ER）関連経路をまたいで細胞のエネルギーホメオスタシスと脂質取り扱いの協調に寄与し、脂肪滴ダイナミクスや膜組成などの過程に影響を与える。ACSL1の活性や発現パターンの変化は、代謝性炎症、インスリン抵抗性、肝脂肪化、ならびに心血管系に関連する脂質リモデリングの文脈でしばしば研究されており、アシルCoAプールの変動がシグナル伝達やミトコンドリア機能を再配線し得る。したがってAcsl1は、マウスモデルや細胞系において脂肪酸代謝、栄養感知、脂質駆動性ストレス応答を解析するための有用な結節点である。

ACSL1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Acsl1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACSL1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Acsl1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAcsl1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACSL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAcsl1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACSL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAcsl1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACSL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。