ACP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418950

概要

Acp2は、リソソーム酸性ホスファターゼ2（ACP2）をコードしており、リソソームの酸性ルーメン内でリン酸エステルの代謝回転に寄与する加水分解酵素です。ACP2活性は、リソソーム依存的な高分子分解を支えるとともに、エンドリソソーム輸送、オートファジー、細胞内の栄養リサイクル経路と関連します。リソソームホスファターゼ機能の変化は細胞小器官の恒常性を乱し得るため、リソソーム機能障害や神経変性に関連する表現型の機序研究とも関係があります。マウスモデルにおいてAcp2は、リソソーム酵素バランスが細胞ストレス応答、免疫細胞機能、組織恒常性にどのように影響するかを検討するうえで有用です。

ACP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAcp2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acp2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Acp2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acp2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACP2の機能に不可欠なAcp2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Acp2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acp2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACP2 HDRプラスミド（m）および ACP2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAcp2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAcp2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。