ACP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418950

Descripción general

Acp2 codifica la fosfatasa ácida lisosomal 2 (ACP2), una hidrolasa que contribuye al recambio de ésteres fosfato dentro del lumen ácido de los lisosomas. La actividad de ACP2 favorece la degradación de macromoléculas dependiente de lisosomas y se relaciona con el tráfico endolisosomal, la autofagia y las vías de reciclaje de nutrientes celulares. Las alteraciones en la función de fosfatasas lisosomales pueden perturbar la homeostasis del orgánulo y son relevantes para mecanismos estudiados en la disfunción lisosomal y en fenotipos asociados a la neurodegeneración. En modelos murinos, Acp2 es útil para investigar cómo el equilibrio de enzimas lisosomales influye en las respuestas al estrés celular, la función de las células inmunitarias y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acp2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acp2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acp2 para la investigación de la señalización de ACP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acp2 críticos para la función de ACP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acp2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acp2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACP2 (m) y el plásmido HDR ACP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acp2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acp2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.