ACO2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404434-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACO2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACO2 Double Nickase Plasmid (h) e il ACO2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACO2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACO2 Antibody (775F2I): sc-517651
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACO2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACO2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACO2 codifica l’aconitasi mitocondriale 2, un enzima ferro-zolfo [4Fe–4S] che catalizza la isomerizzazione reversibile del citrato in isocitrato nel ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Sostenendo il metabolismo ossidativo, la produzione di NADH e la generazione mitocondriale di ATP, ACO2 contribuisce all’omeostasi redox e alla capacità bioenergetica cellulare. L’attività di ACO2 è collegata alle risposte allo stress mitocondriale e alla sensibilità alle specie reattive dell’ossigeno tramite l’integrità dei cluster ferro-zolfo. Alterazioni della funzione di ACO2 sono state associate a disfunzioni metaboliche e a fenotipi di malattia mitocondriale, rendendolo un bersaglio utile per studiare il rimodellamento bioenergetico in modelli di cancro e neurodegenerazione.
ACO2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACO2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACO2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACO2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACO2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.