ACCα Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401102-NIC

ACACA codifica a acetil‑CoA carboxilase alfa (ACCα), uma enzima dependente de biotina que catalisa a conversão de acetil‑CoA em malonil‑CoA dependente de ATP, a etapa comprometida da síntese de ácidos graxos de novo. Ao controlar os níveis de malonil‑CoA, a ACCα coordena o fluxo anabólico de lipídios e regula indiretamente a β‑oxidação mitocondrial de ácidos graxos por meio da inibição da CPT1, conectando o estado nutricional à homeostase energética. A atividade da ACCα é integrada à sinalização de AMPK e a programas transcricionais responsivos a lipídios, moldando a biogênese de membranas, a formação de gotículas lipídicas e a partição do acetil‑CoA. A desregulação da expressão ou da atividade de ACACA tem sido associada a fenótipos de doenças metabólicas e a vulnerabilidades dependentes de lipídios no metabolismo de células cancerosas, sustentando seu uso em estudos de reprogramação metabólica e lipogênese.

ACCα O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACACA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACACA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACACA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACACA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.