ACBD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404320-ACT

A ACBD3 humana (acyl-CoA binding domain containing 3), também conhecida como GCP60, é uma proteína de andaime associada ao complexo de Golgi que coordena o tráfego de membranas e a comunicação entre organelas. Ela interage com a maquinaria de sinalização da fosfatidilinositol 4-quinase e com múltiplos fatores virais e do hospedeiro para modular a estrutura do Golgi, a homeostase lipídica e a formação de organelas de replicação. Por meio de funções no ancoramento de vesículas, na triagem de proteínas e na transferência de lipídios em sítios de contato entre membranas, a ACBD3 influencia a dinâmica da via secretória e as respostas celulares ao estresse. Vias associadas à ACBD3 desreguladas têm sido estudadas em contextos que incluem a biologia de infecções virais e alterações na função e na sinalização do Golgi associadas ao câncer.

ACBD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACBD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACBD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACBD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACBD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACBD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACBD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACBD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACBD3 em células tumorais com expressão de ACBD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.