Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABHD5: sc-402273-ACT

ABHD5 humain (également appelé CGI-58) code un coactivateur associé aux gouttelettes lipidiques, qui couple la mobilisation des lipides neutres à l’équilibre énergétique cellulaire en stimulant l’activité de la lipase des triglycérides du tissu adipeux et en favorisant l’hydrolyse des triacylglycérols. En régulant le renouvellement des gouttelettes lipidiques, le flux d’acides gras et la β‑oxydation mitochondriale en aval, ABHD5 contribue à coordonner l’homéostasie métabolique et la signalisation lipidique. Une altération de la fonction d’ABHD5 est associée à un stockage lipidique anormal et à une accumulation ectopique de lipides, reliant cette voie à des phénotypes héréditaires de stockage des lipides neutres ainsi qu’à des mécanismes plus larges de maladies métaboliques. Dans des contextes cancéreux et inflammatoires, les modifications du métabolisme lipidique et de la dynamique des gouttelettes lipidiques influencées par ABHD5 peuvent remodeler la composition membranaire et les réponses au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour la cartographie des voies dans divers systèmes modèles.

ABHD5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABHD5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABHD5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABHD5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABHD5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABHD5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABHD5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABHD5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABHD5 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABHD5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.