ABCG8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426583-ACT

O gene Abcg8 de camundongo codifica o transportador ABCG8 da família ABC (ATP-binding cassette), um parceiro heterodimérico obrigatório de ABCG5 que medeia o efluxo de esteróis através de membranas apicais. Em hepatócitos e enterócitos, o complexo ABCG5/ABCG8 limita a absorção intestinal e promove a secreção biliar de colesterol e de esteróis vegetais, integrando-se a redes de manejo lipídico governadas pela sinalização de LXR e pelo transporte entero-hepático. A atividade de ABCG8 influencia a homeostase sistêmica de esteróis, associando sua desregulação a perfis lipídicos plasmáticos alterados e a fenótipos de acúmulo de esteróis. Como resultado, Abcg8 é amplamente estudado em vias que conectam o transporte intestinal, a secreção hepatobiliar e mecanismos de doença metabólica.

ABCG8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Abcg8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABCG8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Abcg8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Abcg8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABCG8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Abcg8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABCG8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABCG8 em células tumorais com expressão de Abcg8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.