ABC1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-418929-ACT

マウス Abca1 は、ATP 結合カセット（ABC）トランスポーターである ABC1 をコードしており、アポリポタンパク質への細胞内コレステロールおよびリン脂質の排出（エフラックス）を制御する主要因子である。これにより、初期 HDL の生合成と脂質恒常性が維持される。ABC1 の活性は LXR/RXR による転写プログラムと統合的に働き、マクロファージの脂質処理、膜リモデリング、炎症シグナル伝達とも交差する。Abca1 の発現や機能が破綻するとコレステロール輸送が乱れ、泡沫細胞形成が促進されるため、動脈硬化関連経路や脂質蓄積表現型の文脈で広く研究されている。マウスモデルでは、Abca1 はコレステロール輸送に結び付く脂質依存的な免疫細胞機能、肝臓脂質代謝、ならびに神経炎症過程への影響を検討する目的にも用いられる。

ABC1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Abca1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABC1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Abca1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAbca1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAbca1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAbca1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。