AATK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418928

概要

Aatkは、アポトーシス関連チロシンキナーゼ（AATK）をコードしており、神経系に豊富に発現するセリン／スレオニンキナーゼです。AATKは、発生過程やストレス条件下において、神経細胞の分化、神経突起の伸長、および生存・死の意思決定を支えます。AATK活性はアポトーシスや増殖因子シグナル伝達プログラムと連携し、細胞骨格の再構築や転写応答に影響を与えることで、細胞運命の形成に関与します。AATKの発現やシグナル伝達の異常は、神経細胞の成熟の変化や変性への脆弱性と関連づけられており、神経発生メカニズムや神経変性疾患の生物学の研究において重要です。マウス系では、Aatkはキナーゼ依存的な神経細胞形態の制御や、ストレス誘導性の細胞死経路を解析するための扱いやすいノードとして機能します。

AATK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAatk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aatk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aatkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AATKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AATKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aatk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AATKの機能に不可欠なAatkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aatkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AATK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAATK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aatk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AATK HDRプラスミド（m）および AATK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAatkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAatk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。