AANAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418927

概要

マウスAanatは、メラトニン生合成の律速酵素であるアリールアルキルアミンN-アセチルトランスフェラーゼ（AANAT）をコードしており、松果体およびその他の組織でセロトニンをN-アセチル化してN-アセチルセロトニンへ変換する反応を触媒します。AANAT活性は、cAMP/PKAシグナル伝達、リン酸化依存的な安定化、協調的な転写制御を介して概日性の手がかりにより厳密に調節されており、細胞代謝を明暗サイクルへの同調（エントレインメント）と結び付けています。メラトニンおよび関連するインドールアミン中間体を調節することで、Aanatは睡眠–覚醒調節、季節性生理、神経内分泌シグナルに影響を与えます。AANATの発現や活性の異常は、実験系において概日リズムの乱れや、ストレス・気分・代謝に関わる表現型の変化と関連付けられており、経路に焦点を当てた研究に有用なノードとなります。

AANAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAanat遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aanat内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aanatのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AANATタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AANATシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aanat欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AANATの機能に不可欠なAanatエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aanatゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AANAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAANAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aanat遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AANAT HDRプラスミド（m）および AANAT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAanatホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAanat標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。