AANAT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418927

Panoramica

Il gene murino **Aanat** codifica l’arilalchilammina N-acetiltransferasi (AANAT), un enzima limitante la velocità nella biosintesi della melatonina che catalizza l’N-acetilazione della serotonina a N-acetilserotonina nella ghiandola pineale e in altri tessuti. L’attività di AANAT è strettamente regolata da segnali circadiani tramite la via di segnalazione cAMP/PKA, la stabilizzazione dipendente dalla fosforilazione e un controllo trascrizionale coordinato, collegando il metabolismo cellulare all’entrainment del ciclo luce–buio. Modulando la melatonina e intermedi indolaminici correlati, Aanat influenza la regolazione sonno–veglia, la fisiologia stagionale e la segnalazione neuroendocrina. Un’espressione o un’attività di AANAT deregolate sono state associate, in sistemi sperimentali, a perturbazioni dei ritmi circadiani e ad alterazioni di fenotipi legati a stress, umore e metabolismo, rendendolo un nodo utile per studi mirati su specifiche vie biologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AANAT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aanat in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aanat insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aanat a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AANAT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aanat per lo studio della segnalazione di AANAT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aanat critici per la funzione di AANAT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aanat per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AANAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AANAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aanat. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AANAT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AANAT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aanat per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aanat definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.