A-Raf Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401799

Visão geral

ARAF codifica A-Raf, uma quinase de serina/treonina da família RAF que conecta o RAS ativado na membrana plasmática à cascata de sinalização MAPK/ERK. A-Raf participa da regulação da sinalização mitogênica, da diferenciação e das respostas ao estresse por meio do controle da via RAF–MEK–ERK e da comunicação cruzada (crosstalk) com outros programas de sobrevivência e apoptose. Embora BRAF e RAF1 sejam implicados com mais frequência, a sinalização RAF desregulada e alterações na expressão ou função de ARAF podem contribuir para uma saída aberrante da via, relevante para a transformação oncogênica e para decisões alteradas de destino celular. Como componente de um módulo central de transdução de sinais, A-Raf é estudada em contextos como a dinâmica de sinalização dirigida por RAS, a regulação por feedback e a reorganização da via (pathway rewiring) em modelos celulares relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO A-Raf (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ARAF em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ARAF, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ARAF na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína A-Raf.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ARAF para a investigação da sinalização de A-Raf, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ARAF críticos para a função A-Raf
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ARAF para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo A-Raf Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo A-Raf Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ARAF. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo A-Raf Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR A-Raf (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ARAF para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ARAF definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.