A-Raf Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401799

Descripción general

ARAF codifica A-Raf, una quinasa de serina/treonina de la familia RAF que conecta el RAS activado en la membrana plasmática con la cascada de señalización MAPK/ERK. A-Raf participa en la regulación de la señalización mitogénica, la diferenciación y las respuestas al estrés mediante el control de la vía RAF–MEK–ERK y la interacción cruzada con otros programas de supervivencia y apoptosis. Aunque BRAF y RAF1 se implican con mayor frecuencia, la señalización RAF desregulada y la expresión o función alteradas de ARAF pueden contribuir a una salida anómala de la vía, relevante para la transformación oncogénica y decisiones alteradas del destino celular. Como componente de un módulo central de transducción de señales, A-Raf se estudia en contextos como la dinámica de señalización impulsada por RAS, la regulación por retroalimentación y la reconfiguración de vías en modelos celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO A-Raf (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ARAF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ARAF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ARAF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína A-Raf.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ARAF para la investigación de la señalización de A-Raf, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ARAF críticos para la función de A-Raf
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ARAF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido A-Raf CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido A-Raf CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ARAF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR A-Raf (h) y el plásmido HDR A-Raf (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ARAF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ARAF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.