A-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404328

概要

MYBL1は転写因子A-Mybをコードしており、A-Mybは配列特異的にDNAへ結合するタンパク質として、細胞周期の進行、分化、および系譜に制限された増殖に関連する遺伝子発現プログラムを制御します。A-Mybは、クロマチン関連プロセスやチェックポイントシグナル伝達を制御する転写ネットワークの中で機能し、DNA複製や有糸分裂への移行に関与する遺伝子の発現に影響を与えます。MYBL1活性の制御異常や調節環境の変化は、複数の組織において、異常な増殖状態や腫瘍性の転写プログラムと関連づけられてきました。核内の転写制御因子として、A-Mybは発生上のシグナルを協調的な転写出力へ結び付ける役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

A-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYBL1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYBL1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYBL1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、A-Mybタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、A-Mybシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYBL1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• A-Mybの機能に不可欠なMYBL1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYBL1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• A-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびA-Myb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYBL1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  A-Myb HDRプラスミド（h）および A-Myb HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYBL1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYBL1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。