Plásmido CRISPR de Activación (h) 12-LO: sc-403010-ACT

ALOX12 codifica la 12-lipooxigenasa (12-LO), una dioxigenasa de hierro no hemo que convierte el ácido araquidónico en ácido 12(S)-hidroperoxieicosatetraenoico y, posteriormente, en mediadores lipídicos 12-HETE. Estos eicosanoides regulan la activación plaquetaria, la señalización vascular y epitelial, las respuestas al estrés oxidativo y la remodelación de membranas, lo que vincula la actividad de ALOX12 con vías inflamatorias y sensibles al estado redox. La señalización de 12-LO se entrecruza con programas de peroxidación lipídica y de modulación inmunitaria que influyen en la proliferación, la adhesión y la migración celulares. La desregulación de la expresión de ALOX12 o de su flujo enzimático se ha asociado con contextos cardiometabólicos y neuroinflamatorios, así como con la biología del microambiente asociado a tumores, lo que impulsa estudios mecanísticos de las redes de mediadores lipídicos.

12-LO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALOX12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

12-LO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALOX12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALOX12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 12-LO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALOX12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 12-LO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 12-LO en células tumorales con expresión de ALOX12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.