γ-GCSm CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418078-ACT

GCLMは、グルタチオン（GSH）生合成の律速酵素を構成する主要成分であるグルタミン酸‐システインリガーゼ（γ-GCS）の修飾サブユニット（γ-GCSm）をコードします。γ-GCSmは、ホロ酵素の触媒効率およびフィードバック感受性を調節することで、細胞内のレドックス緩衝能、解毒能、ならびにチオール恒常性の制御に寄与します。この機能によりGCLMは、酸化ストレス応答やNRF2により制御される抗酸化遺伝子の転写プログラムと結びつき、外来性化学物質や活性酸素種に対する感受性に影響を与えます。文献では、GCLMの活性または発現の変化が、炎症状態、神経変性、代謝機能障害、がんに関連したストレス適応などに関わるレドックス不均衡と関連することが示されています。

γ-GCSm CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCLMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ-GCSm CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCLM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCLM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ-GCSmの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCLM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ-GCSm依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCLM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ-GCSm経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。